产品及特点
本产品是基于探针法荧光定量PCR原理研发的检测试剂盒，具有以下特点：

主要特点

1. 即开即用，仅需用户提供样品DNA模板。
2. 引物等组分经过优化，具备高灵敏度。
3. 提供阳性对照，有助于区分假阴性样品。
4. 高特异性：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，避免与其它生物样本的DNA发生交叉反应。
5. 可用于定性及定量检测，定量检测的线性范围至少为5个数量级。
6. 该产品可进行50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 本产品仅限于科研用途。

方法步骤

一、DNA提取（样本制备区）

使用选定的DNA提取方法提取纯化样品DNA，本试剂盒与市面上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

为避免污染，阳性对照的高浓度样品稀释操作需在独立区域进行。步骤如下：

1. 标记6个离心管，编号为7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL的阳性对照（1×10E8拷贝/μL），充分震荡1分钟，得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品，之后放冰待用。
4. 换枪头，在6号管中加入5μL的阳性对照（从7号管稀释得），充分震荡1分钟，得到1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。
5. 按此类推将阳性对照逐步稀释至5号管，直至获得6个稀释度的标准曲线样品，如不需要制作标准曲线，可将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

三、试剂配制（试剂准备区）

若有N个待检样品，准备N+2个qPCR管，向各PCR管中分别加入所需成分（详细操作请参考说明书，可向利来国际索取）。

四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中分别加入2μL模板，按以下顺序：阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置于PCR扩增仪器样品槽，按照扩增程序进行反应（详细程序请参阅说明书）。

六、结果分析

1. 制作标准曲线时，以阳性对照浓度的对数值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，并通过样品的Ct值推算样品DNA浓度的对数值。

2. 未制作标准曲线的结果判定：
阳性对照：Ct值<30，且呈现显著的指数增长，形成典型S型曲线。
阴性对照：Ct值为38或无Ct值,无明显的指数增长期。
样本检测：Ct值<35，表明样本中检测到待测目标，结果为阳性；Ct值38或无Ct值则结果为阴性；Ct值在35-38范围需进行复检，如复检结果仍在该范围且有指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

运输及保存

本产品需低温运输，存放于-20℃环境，保存期为一年。阳性对照需单独存置，避免污染其它试剂。

如需更多信息或指导，欢迎与利来国际联系！